分子克隆实验指南（原书第四版 下册）
出版时间 2017
内容简介
分子克隆技术30多年来一直是全球生命科学领域实验室专业技术的基础。冷泉港实验室出版的《分子克隆实验指南》一书拥有的可靠性和*性，使本书成为业内*流行、*具影响力的实验室操作指南。第四版的《分子克隆实验指南》保留了之前版本中备受赞誉的细节和准确性，10个原有的核心章节经过更新，反映了标准技术的发展和创新，并介绍了一些前沿的操作步骤。同时还修订了第三版中的核心章节，以突出现有的核酸制备和克隆、基因转移及表达分析的策略和方法，并增加了12个新章节，专门介绍*激动人心的研究策略，包括利用 DNA甲基化技术和染色质免疫沉淀的表观遗传学分析、RNAi、新一代测序技术，以及如何处理数据生成和分析的生物信息学，例如介绍了分析工具的使用，如何比较基因和蛋白质的序列，鉴定多个基因的常见表达模式等。本书还保留了必不可少的附录：包括试剂和缓冲液、常用技术、检测系统、一般安全原则和危险材料。任何使用分子生物学技术的基础研究实验室都将因拥有一册《分子克隆实验指南》而受益。本书可作为学习遗传学、分子细胞生物学、发育生物学、微生物学、神经科学和免疫学等学科的重要指导，可供生物学、医药卫生，以及农、林、牧、渔、检验检疫等方面的科研、教学与技术人员参考。
目录
下册
第17章 利用报道基因系统分析基因表达调控 1102
导言 1103
方案1 哺乳动物细胞提取物中B一半乳糖苷酶的测定 1112
附加方案 化学发光实验检测B一半乳糖苷酶活性 1115
方案2 单萤光素酶报道基因实验 1118
方案3 双萤光素酶报道基因实验 1123
方案4 酶联免疫吸附试验定量检测绿色荧光蛋白 1128
方案5 用四环素调控基因表达建立细胞系 1131
附加方案 有限稀释法筛选悬浮细胞的稳定克隆 1138
信息栏 1140
第18章 RNA干扰与小RNA分析 1170
导言 1171
方案1 双链siRNA制备 1185
方案2 通过转染双链siRNA在哺乳动物细胞中进行RNA干扰 1187
方案3 通过转染双链siRNA在果蝇S2细胞中进行RNA干扰 1190
方案4 体外转录法制备dsRNA 1192
方案5 采用dsRNA浸泡果蝇S2细胞进行RNA干扰 1196
方案6 采用dsRNA转染在果蝇S2细胞中进行RNA干扰 1198
方案7 小RNA的Northern杂交分析 1199
方案8 反转录定量PCR分析小RNA 1203
方案9 构建小RNA高通量测序文库 1206
方案10 抑制miRNA功能的反义寡核苷酸制备 1215
方案11 在哺乳动物细胞中通过反义寡核苷酸抑制miRNA功能 1216
方案12 在果蝇S2细胞中通过反义寡核苷酸抑制miRNA功能 1218
信息栏 1219
第19章 克隆基因的表达以及目的蛋白的纯化和分析 1225
导言 1226
方案1 在大肠杆菌中利用可用IPTG诱导的启动子表达克隆化基因 1249
附加方案 目标蛋白可溶性表达的小量试验 1255
替代方案 在大肠杆菌中利用阿拉伯糖BAD启动子表达克隆基因 1260
替代方案 信号肽融合虽白的亚细胞定位 1261
方案2 用杆状病毒表达系统表达克隆基因 1265
附加方案 噬菌斑测定法确定杆状病毒原液的滴度 1271
替代方案 用于转染昆虫细胞的杆粒DNA制备 1274
方案3用 甲醇诱导启动子AOX1在毕赤酵母中表达克隆基因 1277
附加方案 酵母培养物的冻存 1287
方案4 用于纯化大肠杆菌中表达可溶性蛋白的细胞提取物的制备 1291
附加方案 酵母细胞玻璃珠裂解法 1296
替代方案 温和的热诱导的酶裂解法制备大肠杆菌细胞提取物 1298
替代方案 用溶菌酶裂解和冻融法联用制备大肠杆菌细胞提取物 1300
方案5 采用固化的金属亲和层析纯化多聚组氨酸标记的蛋白质 1302
附加方案 Niz+-NTA树脂的清洗与再生 1309
替代方案 组氨酸标签蛋白的快速液相色谱纯化 1310
方案6 采用谷胱甘肽树脂以亲和层析纯化融合蛋白 1314
方案7 包含体中表达蛋白的增溶 1321
方案8 蛋白质的SDS-PAGE 1325
替代方案 用考马斯亮蓝进行SDS-PAGE凝胶染色的各种不同方法 1335
替代方案 用银盐进行SDS-PAGE凝胶染色 1336
方案9 蛋白质的免疫印迹分析 1340
方案 10测定蛋白质浓度的方法 1347
信息栏 1353
第20章 利用交联技术分析染色质结构与功能 1358
导言 1359
方案1 甲醛交联 1369
方案2 制备用于染色质免疫沉淀的交联染色质 1371
方案3 染色质免疫沉淀(ChIP) 1373
方案4 染色质免疫沉淀-定量聚合酶链反应( ChIP-qPCR) 1377
方案5 染色质免疫沉淀-芯片杂交（ChIP-chip） 1378
方案6 染色质免疫沉淀-高通量测序(ChIP-seq) 1385
方案7 交联细胞3C文库的制备 1389
方案8 环形染色质免疫沉淀（ChIP-loop）文库的制备 1393
方案9 连接产物对照组文库的制备 1398
方案10 PCR检测3C、ChIP-loop和对照文库中的3C连接产物：文库滴定与相互作用频率分析 1400
方案11 3C、ChIP-loop和对照组文库的4C分析 1404
方案12 3C、ChIP-loop和对照组文库的5C分析 1408
信息栏 1412
第21章 紫外交联免疫沉淀(CLIP)技术进行体内RNA结合位点作图 1415
导言 1416
方案1 CLIP实验免疫沉淀严谨性的优化 1424
方案2 活细胞的紫外交联和裂解物制备 1429
方案3 RNA酶滴定、免疫沉淀及SDS-PAGE 1432
方案4 3'-接头的连接祁用SDS-PAGE进行大小选择 1441
替代方案 去磷酸化RL3接头5端的标记 1445
方案5 RNA标签的分离、5二接头的连接和反转录PCR扩增 1446
方案6 RNA CLIP标签测序 1456
方案7 RNA接头胶回收及保存 1458
信息栏 1460
第22章 Gateway相容酵母单杂交和双杂交系统 1464
导言 1465
方案1 构建酵母单杂交DNA-诱饵菌株 1474
替代方案 用复性引物从DNA诱饵中获得入门克隆产物 1481
方案2 生成酵母双杂交DB-诱饵菌株 1484
方案3 从活化域捕获文库中鉴定相互作用分子 1490
方案4 高效的酵母转化 1496
方案5 用于B-半乳糖苷酶活力的菌落转移比色测定 1500
方案6 酵母克隆的PCR 1502
信息栏 1504
附录1 试剂和缓冲液 1507
附录2 常用技术 1533
附录3 检测系统 1541
附录4 一般安全原则和危险材料 1565
索引 1573